北方墨点法
北方墨点法(英语:),又称 RNA 印迹法,是分子生物学、生物化学中常用的实验方法,通过探测样品中的RNA(或隔离的mRNA)来研究基因表达。[1][2]

通过北方墨点法来检测RNA的流程图
利用探针侦测由凝胶电泳分离出来的RNA片段,寻找含有特定串行的RNA片段。与南方墨点法相似,RNA样品经过凝胶电泳后会按照大小分离,然后将样品从凝胶转印到膜上,并用与目标串行互补的标记的探针来探测。实验结果可以根据所用探针的不同,以多种方式来观察,但大多数都显示的是样品中被探测的RNA条带的相对位置,也就是分子大小;而条带的强度则与样品中目标RNA的含量相关。这一方法可以测量目标RNA在不同样品中的情况,因此已经被普遍用于研究特定基因在生物体中表现的时刻和表现量,也是这类研究中最基本的手段。
发明者是史丹佛大学的James Alwine和乔治·斯塔克(George Stark)在1977年发明,其名字是源于第一种墨点技术,南方墨点法(命名者为Edwin Southern)[1],两者很相似,与南方墨点法主要的不同是北方墨点法探测的是RNA分子,而不是DNA分子。[3]
原理
与南方墨点法相似,胶体可以选用琼脂凝胶或是聚丙烯酰胺凝胶,被检测物是RNA,「探针」(probe)是与目标串行互补的RNA、DNA串行或是寡核苷酸,但是探针至少要有25个碱基对与目标串行互补。

Capillary blotting system setup for the transfer of RNA from an electrophoresis gel to a blotting membrane.
胶体
RNA样品通常以含甲醛的琼脂凝胶电泳来分离,甲醛作为RNA变性剂,将RNA的二级结构变性成一级结构。凝胶内用溴化乙锭(EtBr)染色,可在UV光下观察到RNA样品的品质、大小。
实验步骤
实验大至分为铸胶、跑胶、转渍、北方杂合反应等几个部分。
参考文献
- Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J. Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell, 5th ed. Garland Science, Taylor & Francis Group, NY, pp 538–539.
- Kevil, C. G., Walsh, L., Laroux, F. S., Kalogeris, T., Grisham, M. B., Alexander, J. S. (1997) An Improved, Rapid Northern Protocol. Biochem. and Biophys. Research Comm. 238:277–279.
- Bor, Y.C.; Swartz, J.; Li, Y.; Coyle, J.; Rekosh, D.; Hammarskjold, Marie-Louise. . Nature Protocols. 2006. doi:10.1038/nprot.2006.216.
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